細(xì)胞傳代是細(xì)胞培養(yǎng)中非常重要的一個(gè)步驟，用于維持和擴(kuò)增特定細(xì)胞系的數(shù)量。細(xì)胞傳代的目的是保持細(xì)胞的健康狀態(tài)、避免細(xì)胞老化和突變，并保證細(xì)胞的穩(wěn)定性和一致性。

 
細(xì)胞代傳
 

貼壁細(xì)胞傳代

 

培養(yǎng)器皿選擇：選擇適合貼壁細(xì)胞傳代的培養(yǎng)器皿，確保器皿表面干凈、無(wú)菌。

 

細(xì)胞密度控制：根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，控制細(xì)胞的密度。通常在細(xì)胞生長(zhǎng)至80%～90%的密度時(shí)，適合進(jìn)行傳代。

 

細(xì)胞分離：使用胰蛋白酶等消化酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化，以將細(xì)胞從培養(yǎng)器皿表面分離。消化時(shí)間和酶的濃度應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型來(lái)確定。

 

細(xì)胞計(jì)數(shù)：對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，以確定傳代時(shí)需要接種的細(xì)胞數(shù)量。

 

細(xì)胞離心：將細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行離心，以沉淀細(xì)胞。離心速度和時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型來(lái)確定。

 

細(xì)胞接種：去上清，加適量新鮮完全培養(yǎng)液吹打重懸細(xì)胞。然后轉(zhuǎn)移適量細(xì)胞懸液至新培養(yǎng)瓶中，再加入一定量完全培養(yǎng)液，輕輕搖晃培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞均勻分布。

 

培養(yǎng)條件：將培養(yǎng)器皿放置二氧化碳培養(yǎng)箱中，并提供適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件，如溫度、濕度和CO2濃度。遵循細(xì)胞系的特定培養(yǎng)條件，以確保其正常生長(zhǎng)和增殖。

 

懸浮細(xì)胞傳代

 

細(xì)胞密度控制：根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，控制細(xì)胞的密度。通常在細(xì)胞生長(zhǎng)至80%～90%的密度時(shí)，適合進(jìn)行傳代。

 

細(xì)胞計(jì)數(shù)：對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，以確定傳代時(shí)需要接種的細(xì)胞數(shù)量。

 

細(xì)胞離心：將細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行離心，以沉淀細(xì)胞。離心速度和時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型來(lái)確定。

 

培養(yǎng)基的更換：去除營(yíng)養(yǎng)匱乏的舊培養(yǎng)液，用新的培養(yǎng)基代替?？梢允褂脽o(wú)菌的吸管或移液器謹(jǐn)慎地進(jìn)行操作，避免對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性損傷。

 

細(xì)胞接種：將沉淀的細(xì)胞重新懸浮在新的培養(yǎng)基中，并將其接種到新的培養(yǎng)器皿中。根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)要求，調(diào)整細(xì)胞密度和培養(yǎng)基的體積。接種后，輕輕搖晃培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞均勻分布。

 

培養(yǎng)條件：將培養(yǎng)器皿放回恒溫培養(yǎng)箱中，并提供適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件，如溫度、濕度和CO2濃度。遵循細(xì)胞系的特定培養(yǎng)條件，以確保其正常生長(zhǎng)和增殖。

 

細(xì)胞傳代培養(yǎng)注意事項(xiàng)

 

1.在吹打過(guò)程中，不要將移液管中的液體全部排出，同時(shí)要控制吹打節(jié)奏，以避免吹出泡沫。泡沫會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損傷，并且難以在顯微鏡下觀察到是否所有細(xì)胞都被吹打下來(lái)。

 

2.不要等待貼壁細(xì)胞完全鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶，因?yàn)檫@可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢或死亡。

 

3.對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化時(shí)，最好不要等到細(xì)胞成片飄起，否則會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)，并且第二天培養(yǎng)中會(huì)出現(xiàn)較多的死細(xì)胞。